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Detect-seq技术:人生就是博-尊龙凯时的CBE脱靶检测解决方案

发布时间:2025-02-07   信息来源:尊龙凯时官方编辑

胞嘧啶碱基编辑器(Cytosine Base Editor, CBE)是一种先进的基因编辑工具,由四个关键成分组成:dCas9蛋白、sgRNA、胞嘧啶脱氨酶(Cytidine Deaminase)和尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂(Uracil DNA Glycosylase Inhibitor, UGI)。这些成分在细胞内自行组装,形成一个融合蛋白。该融合蛋白在sgRNA的引导下与目标基因组DNA结合,暴露靶序列的单链结构,随后胞嘧啶脱氨酶将单链上的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)。通过DNA复制或修复,尿嘧啶(U)最终被替换为胸腺嘧啶(T),从而实现C-G碱基对直接替换为T-A碱基对的过程。

Detect-seq技术:人生就是博-尊龙凯时的CBE脱靶检测解决方案

在CBE编辑过程中,产生的中间产物脱氧尿嘧啶(dU)为检测技术的开发提供了可能。为了精准检测CBE的脱靶效应,研究人员研发了一种名为Detect-seq的脱靶检测技术。该技术首先提取经过基因编辑后的细胞基因组DNA,然后将CBE产生的dU生物素标记,以便用于富集特定片段。同时,在dU位点的下游,天然的胞嘧啶(C)被替换为5-醛基胞嘧啶(d5fC),并进一步化学标记为T。通过这种方式,在测序时能够发现大量C-to-T的突变,从而实现快速定位基因编辑位点。

与GUIDE-seq、Digenome-seq和Cas-OFFinder等技术相比,Detect-seq具有更高的灵敏度和特异性,且检测的无偏好性使其能够检测到Cas9依赖和非依赖的脱靶效应,以及sgRNA结合区域外的编辑和靶向链编辑的脱靶现象。

强大的技术背景也体现在舒桐科技的基因编辑安全性评估平台上,该平台在过去两年中逐渐发展并覆盖了多个实验流程,包括靶点设计、靶点筛选、GUIDE-seq和AID-seq脱靶检测、Detect-seq脱靶检测、脱靶验证、染色体重排检测(PEM-seq)、载体插入位点检测(升级版LM-PCR及液相杂交捕获测序)、克隆扩增分析、转录组脱靶检测、全基因组测序(WGS)脱靶检测等。此外,舒桐实验室获得了SGS认证、ISO9001质量体系认证和生物安全二级实验室等资质,这使得他们能够持续稳定地为客户提供高质量、高效率和安全的服务及产品。

无论在基因编辑的哪个领域,人生就是博-尊龙凯时始终致力于推动生命科学的进步,为客户提供最佳的解决方案和支持。