人生就是博-尊龙凯时的甘油检测方法为生物医疗领域提供了高效的解决方案。甘油作为甘油三酯水解的产物，它的含量与游离脂肪酸密切相关，因此成为可靠的检测指标，且具有更高的检测便利性。我们提供的试剂盒经过优化，能够准确检测实体组织和细胞中的甘油含量，线性范围为10-1200µmol/L。

检测原理

在存在ATP的条件下，甘油会被甘油激酶磷酸化形成3-磷酸甘油，随后通过甘油磷酸氧化酶氧化生成过氧化氢。在过氧化物酶的催化下，生成的过氧化氢将生色底物转化为苯kun亚胺，其光密度值与甘油浓度呈正比关系。

适用范围

本方法适用于检测各种实体组织和细胞中的甘油浓度，能有效满足生物医学研究中的需求。

试剂盒组成

本试剂盒可进行105次微板检测或30次1ml比色杯检测，包含以下组成：

• 裂解液50ml
• R1试剂16ml
• R2试剂4ml
• 4mmol/L甘油标准品1ml（可在4ºC保存有效6个月）

所需设备

实验所需设备包括酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。最佳测量波长为550nm，若无此波长的仪器，建议优先选择570nm，其次为530nm或490nm。

组织和细胞裂解步骤

对于细胞裂解（包括分化的脂肪细胞），可采用消化和离心法收集细胞，或者直接在培养皿内进行裂解。以6孔板为例，单孔约需2x10⁶个细胞，75cm²瓶约需1x10⁷个细胞。每1-2x10⁶细胞加入0.1ml裂解液，震荡后静置10分钟。

对于动物组织裂解，需确保新鲜组织经过剪切称重后再进行保存，避免因冻存和解冻带来的测量误差。使用减量称重法计算组织重量（约100mg），建议每1mg组织加10µl裂解液，以降低样品之间蛋白质和脂质含量的变异。

裂解液处理和工作溶液配制

裂解后将适量上清液转移至15ml离心管，余下的裂解液可用于BCA法进行蛋白定量。加热处理可在270ºC下灭活脂肪酶，避免样品中出现絮状沉淀。之后以室温5000rpm离心5分钟，上层清液即可用于后续的酶学测定。

工作溶液的配制按4:1比例，将4ml试剂R1与1ml试剂R2混合后立即使用，或在4ºC下保存不超过1天。注意防止甘油污染，来源可能包括操作者或标准品液体微粒的溅射。

标准品稀释与甘油测定

采用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体将4mM甘油标准品进行倍比稀释，记录0浓度对照管。待测样品的体积为10µl，避免过量以免抑制反应；反应可在237ºC或25ºC下进行10分钟，待反应平衡后颜色在60分钟内稳定。

使用蒸馏水和工作液的空白管进行调零后，测定各管的OD值并绘制标准曲线计算甘油浓度。通过将各标准管OD值作为y轴，标准品浓度作为x轴，在Excel中创建散点图，展示结果。最终以每mg蛋白浓度或细胞数校正甘油含量，确保结果的准确性。