本试剂盒专为科学研究设计,禁止用于医学诊断。该人转铁蛋白受体(TFR) Elisa试剂盒运用双抗体一步夹心法进行酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预先包被adropin(AD)抗体的微孔中,依次添加标本、标准品及HRP标记的检测抗体,经过温育与彻底洗涤后,使用底物TMB显色。在过氧化物酶的催化下,TMB转变为蓝色,随后在酸性条件下最终呈现黄色。显色的深浅与样品中adropin(AD)的浓度呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测量吸光度(OD值),进一步计算样品浓度。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作时应避免任何细胞刺激。采集血样后,以3000转的速度离心10分钟,迅速而小心地分离血清与红细胞。
2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂,3000转离心30分钟以取上清液。
3. 细胞上清液:在3000转离心10分钟后,去除颗粒与聚合物。
4. 组织匀浆:将组织与适量生理盐水混合后捣碎,再以3000转离心10分钟,提取上清液。
5. 保存:若样本未能及时检测,请将其按单次用量分装并冻结于-20℃,以避免反复冻融。样本解冻时需在室温下均匀充分解冻。
实验操作注意事项:试剂盒的组成及标准品(S0-S5)浓度依次为0、25、50、100、200、400pg/mL。
试剂的准备:将20×洗涤缓冲液按1:20的比例使用蒸馏水稀释,即1份20×洗涤缓冲液加入19份蒸馏水。
洗板方法与结果判断:在Excel中绘制标准曲线,将标准品浓度作为横坐标,对应OD值作为纵坐标,生成标准品线性回归曲线,并根据曲线方程计算各样本浓度值。
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